关于引物设计的详细步骤有哪些，引物设计的详细步骤这个很多人还不知道，今天菲菲来为大家解答以上的问题，现在让我们一起来看看吧！

1、一般是通过设计软件，例如oligo6，primer5等，你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明，是比较容易的。

2、至于设计引物的一般原则如下：* 序列选取应在基因的保守区段* 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构 * 典型的引物18到24个核苷长。

3、引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。

4、但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。

5、较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。

6、* Tm值在55－65℃（因为60℃核酸外切酶活性最高），GC含量在40%－60%* 引物之间的TM相差避免超过2℃* 引物的3’端避免使用碱基A，引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基* 为避免的扩增，引物设计最好能跨两个外显子。

7、* Taqman探针PCR要求片段长度在80bp－150bp * 引物末端（最后5个核苷酸）不能有超过2个的G和C。

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